دانلود مقاله بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus

کفال ماهیان دریای خزر یکی از مهمترین ماهیان شیلاتی این دریا می باشند.که پس از انتقال از دریای سیاه به دریای خزر، توانستند خود را بااکوسیستم این دریا مطاقبت دهند.هدف از این تحقیق بررسی میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی در شرایط  زمانی… پیشنهاد می کنیم ادامه این مطلب مفید و ارزشمند را در مقاله بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus دنبال نمایید. این فایل شامل 82 صفحه و در قالب word ارائه شده است.

مشخصات فایل بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus

عنوان: بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus
فرمت فایل : word (قابل ویرایش)
تعداد صفحات : 82
حجم فایل : 495 کیلوبایت

بخشی از  مقاله بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus را در ادامه مشاهده خواهید نمود.

مقدمه

    اسپرم عامل مهم تولیدمثل، بقاء و تداوم نسل است. بررسی اسپرم از نظر پارامترهایی مانند توانایی تلقیح، تحرک، درصد اسپرمهای متحرک، سرعت حرکت، فرکانس ضربه تاژکی، میزانATP  و فاکتورهای شیمیایی و بیوشیمیایی، در تشخیص کیفیت اسپرم و کنترل روند تولیدمثلی برخی جانداران از جمله آبزیان  کمک می کند. هدف از این تحقیق بررسی میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی در شرایط دمایی ، زمانی و محلولهای تداوم بخش مختلف می باشد. تاکنون تحقیقات گسترده ای توسط پژوهشگران مختلف روی این سلول صورت گرفته است. با این حال مطالعات انجام شده در ارتباط با میزان ATP اسپرم ماهیان نسبتأ محدود است. این امر تفسیر علت ناموفق بودن پروژه پرورشی کردن برخی ماهیان را دشوار می کند. در این رابطه باید مطالعات بیشتری در زمینه بررسی میزان ATP اسپرم ماهیان صورت پذیرد.

   اسپرم به کمک حرکت ضربه ای تاژک خود شنا می کند. انرژی مورد نیاز برای این حرکت ازطریق هیدرولیز ATP فراهم می شود(Billard et al, 1999 ).تحرک اسپرم به میزان ATPذخیره ای اولیه (Christen et al, 1987) و میزان ATP سنتز شده در طول فاز تحرک (Lahnsteiner et al, 1999 ) وابسته است. در اکثر ماهیانی که دارای لقاح خارجی هستند، ATP سنتتاز قادر به نگهداری نسبتهای بالای ATP هیدرولیز شده مورد نیاز در طول حرکت نیست، لذا میزان ATPبه سرعت کاهش می‌یابد. این کاهش  ATP به موازات کاهش تعداد ضربات تاژکی و سرعت حرکت اسپرم است                           (Christen et al, 1987 و Perchec et al, 1995). تفاوت قابل توجهی بین گونه‌ها در مقدارATP مورد نیاز برای تامین حرکت اسپرم وجود دارد(Mansour et al, 2003 ).

     در این مطالعه میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی  در شرایط مختلف دمایی نمونه گیری (10-12و 18-20 درجه سانتیگراد) و نگهداری 6 ساعته در دماهای مختلف ( دمای اتاق و 4 درجه سانتی گراد) در محلولهای تداوم بخش مختلف( گلیسرول، محلولهای نمکی 65/0 و 7/0 درصد) در زمانهای متفاوت ( 5 روز و 10 روز)  به کمک روش فوق حساس بیولومینوسانس مورد اندازه گیری قرار خواهد گرفت.

فصل اول:

مروری بر تحقيقات گذشته

1- 1 پیشینه تحقیق

     امروزه کشورهای پیشرفته به دلیل تلاش بیشتر و برخورداری از امکانات پیشرفته تر، در زمینه ویژگیهای اسپرم ماهیان و عوامل موثر بر آن تجارب زیادی کسب نموده اند. اطلاعات بدست آمده عمدتأ در مورد ماهیان پرورشی می با شد. دراین مورد کارهای تحقیقاتی زیادی انجام شده است و مطالعات گسترده ایی در خصوص عوامل تاثیرگذار، استرس زا و یا آلوده کننده صورت گرفته نتایج حاصله  با یکدیگر مقایسه شده اند. به مواردی از این پژوهشها در ذیل اشاره شده است.

     ماهیان آبشش آبی نر به دو شیوه تولید مثل می کنند. برخی از نرها که parental نام دارند تولیدمثلشان تا سن 7 سالگی به تاخیر می افتد، اما گروه دیگر (sneaker) زودتر بالغ  میشوند. طبق مطالعات Burness و همکارانش در سال 2004 در هر دو شیوه تولیدمثلی، سرعت حرکت اسپرم و سطوح ATP در 60 ثانیه اول تحرک اسپرم به موازات هم کاهش می یابد. اگرچه میزان ATP اولیه اسپرم ماهیان sneakerنسبت به  ماهیان parental بیشتر است ولی بین شیوه های تولید مثلی آنها تفاوتی وجود ندارد. ضمنأ از لحاظ سرعت حرکت اسپرم، درصد اسپرمهای متحرک یا فعالیت آنزیمهای متابولیک بین شیوه های تولیدمثلی تفاوتی وجود ندارد. هرچند اسپرم ماهیان parental تا حدودی نسبت بالاتری از کراتین فسفوکیناز را نسبت به سیترات سنتاز دارا می باشند. در هر دو شیوه با افزایش فعالیت کراتین فسفوکیناز و سیترات سنتاز،   میزان ATPاسپرم افزایش  (Burness et al, 2004) می یابد.

 طبق گزارشات Kruger و همکارانش در سال 1983 میانگین مدت زمان تحرک اسپرم کپورماهی معمولی Cyprinus carpio به فصل وابستگی داشته و حدودا 2/1 تا 6/1 دقیقه است  Kruger et al , 1983)). ماکزیمم مدت زمان تحرک اسپرم کپورماهی معمولی 2 دقیقه است  1984) ، .( Koldras and Moczarsk

     در کپورماهی، اسپرم و ادرار از یک مجرای تناسلی آزاد می شوند لذا ممکن است اسپرم جمع آوری شده از آن توسط ادرار آلوده شود. طبق مطالعات Perchec و همکارانش در سال 1998 درصورت آلوده نشدن اسپرم ماهی به ادرار، میزان ATP اسپرم حدود nmol  9 – 8 به ازاء 10⁸ اسپرم و سرعت ابتدایی آن حدود       s/ mm 160 –  100 و فرکانس ضربه تاژکی حدود㎐ 50 – 30 اندازه گیری شد. اما، وقتی که مایع اسپرمی با 5/7% ادرار به مدت 1 ساعت آلوده شد، میزان ATP،nmol 5 – 4 به ازاء  10⁸ اسپرم بود و اغلب اسپرمها سرعت ابتدایی کمی معادل s/ ㎛ 100 – 30  و فرکانس ضربه تاژکی حدود㎐ 30 – 10 داشتند. این مسئله نشان می دهد که اسمولالیته پایین ادرارعامل کاهش کیفیت اسپرم کپورماهی است           .(Poupard et   al, 1998)

     Zilli و همکارانش در سال 2004 نشان دادند که یک رابطه خطی بین ظرفیت تلقیح اسپرم و پارامترهای اسپرمی از جمله میزان ATPو فعالیت آمینوترانسفراز وجود دارد Zilli et al, 2004) ).  طبق گزارشات Jezierska و Witeska در سال 1999 اسپرمهای کپور معمولی  مدت زمان  s 80 – 70، فعال می مانند و تحرکشان بعد از 24 ساعت کاهش می یابد، در حالی که اسپرمهای کپورعلفخوار s 55 – 30 فعال می مانند و تحرکشان پس از 8 ساعت کاهش می یابد. اسپرمهای کپورمعمولی پس از 24 ساعت حدود  s10 متحرک می مانند. مدت زمان تحرک اسپرم متاثر از دمایی است که در آن نگهداری می‌شود. حتی نگهداری کوتاه مدت اسپرم (15 دقیقه) در دمای 20°C، موجب کاهش مدت زمان تحرک اسپرم در هر دو گونه ماهی می شود. بطوریکه پس از 2 ساعت نگهداری اسپرم کپورماهی معمولی در دمای 20°C ، تحرک اسپرم حدود 50% کاهش می یابد           ( 1999، Jezierska and Witeska).

      اسپرمهای نگهداری شده در دمای صفر تا  °C 5  قادر به تلقیح تخم هستند. بهرحال چگونگی نگهداری اسپرمها، روی مدت زمان تحرک اسپرم اثر می گذارد  Goodal et al, 1989)). در دماهای پایین تر، مدت زمان تحرک اسپرم طولانی تر است (1996،Babiak،Glogowski). نگهداری اسپرم به مدت 5 ساعت در یخچال (°C 5) روی نسبت تلقیح اسپرم اثر قابل توجهی ندارد. اسپرم کپورماهی معمولی بدون کاهش قابل توجه زمان تحرکش ، حدود 24 ساعت و اسپرم کپور علفخوار حدود 8 ساعت می تواند در یخچال(°C 5) نگهداری شود (Sarnowski et al, 1997 ).

   در بررسی انجام شده بین پنج  حفاظت کننده انجمادی (cryoprotectant) یعنی  DMSO ،DMA، گلیسرول، گلیکول پروپیلن و متانول،DMA  بهترین حفاظت را برای اسپرم گربه ماهی اروپایی (Silurus glanis) فراهم می کند          (, 1999  (Ogier et al. گلیسرول با غلظت 10%  در مقایسه با DMSO یا  گلیکول اتیلن به عنوان بهترین      cryoprotectantبرای اسپرم گربه ماهی اروپایی شناخته شده است. اسپرم منجمد شده توسط گلیسرول 10% ، 36 درصد تحرک داشت ولی اسپرم منجمد شده توسط دو نگهدارنده دیگر هیچ تحرکی نداشت (1993, Linhart et al). در این بررسی محیط منجمد مورد استفاده، یک محلول شور فاقد شکر با زرده تخم مرغ بود. زیرا کارایی کم گلیسرول در محافظت اسپرم ، به شکل رقابت بین شکر و گلیسرول برای واکنش با فسفولیپیدهای غشاء تفسیر شده است (Anchorodogug et al, 1987). متانول دارای اثر محافظت کننده برای اسپرم گربه ماهی اروپایی است. معمولأ متانول برای ماهیان آب شیرین مناطق حاره ای مثل ماهی گورخری Brachydanino rerio    ((Harvey et al,1982 و چندین نمونه تیلاپیا Oreochromis spp  استفاده می شودChao et al,1987)) و (Rana et al,1989).

      Harveyدر سال1983 به این نتیجه رسید که پودر شیر ترکیب شده با متانول برای نگهداری اسپرم تیلاپیا Oreochromis mossambicus در شرایط انجماد نسبت به زرده تخم مرغ ترکیب شده با متانول (70% حرکت در برابر10%) بسیار قویتر است(1983، Harvey). سطح ATP و میزان حرکت اسپرم ماهی قزل آلا رنگین کمان بعد از ذوب بطور قابل توجهی کاهش می‌یابد ((Ogier et al, 1997. اسپرمهای گربه ماهی اروپایی بدون کاهش سطح ATP خیلی متفاوت عمل می کنند. انجماد اسپرمهای گربه ماهی اروپایی با DMA موجب افزایش قابل توجه سطح ATP اسپرم می‌شود. این افزایش احتمالأ ناشی ازDMA ا ی است که موجب تحریک مستقیم سنتزATP می شود. این افزایش سطح ATP در طول فرآیند  cryoprotection احتمالأ یک عامل مهم در تحمل انجماد اسپرمهای گربه ماهی اروپایی در حضورDMA میباشد.

     مطالعات مشابه در جهان اهمیت خاص خود را دارد و در ایران نیز کم کم، جای خود را در بین تحقیقات باز می کند.

1 – 2 تاکسونومی

     بعلت گستردگی کفالها و نیز وجود اختلاف ناچیز بین گونه های آنها، تغییرات زیادی در طبقه بندی آنها رخ داده است.امروزه برای طبقه بندی کفالها از خصوصیات استخوان شناسی از قبیل زوائد مفصلی و عرضی مهره‌ها و علایم مشابه برای شناسایی جنس، شکل و تعداد زوائد باب المعدی برای تعیین گونه، وجود پلکهای چربی تکامل یافته برای تعیین گونه یک جنس و غیر پوشیده بودن استخوان فک بالا در حالتی که دهان بسته است برای تشخیص زیر گونه استفاده می شود.

     سلسله: جانوران

     شاخه: طنابداران

     زیرشاخه: مهره داران

     بالا رده: آرواره داران

     دسته: ماهیان

     رده: ماهیان استخوانی

     زیر رده: شعاع بالگان  Actinopterygii

     دون رده: نوبالگان Neopterygii

     راسته: کفال ماهی شکلان

     خانواده: کفال ماهیان

     گونه: کفال طلایی Mugil auratus (امینی، 1368).

1 – 3 مشخصات کلی راسته کفال ماهی شكلان

باله های شکمی، موقعیت بطنی داشته اما زیاد عقب تر از باله های سینه ای نیستند. استخوان باله های شکمی با ترقوه بوسیله رباط متصل شده اند. دارای دو باله پشتی مجزا هستند که باله اول خاردار و باله دوم علاوه بر خار دارای شعاع نرم نیز می باشد. باله مخرجی در مقابل دومین باله پشتی قرار دارد. فلسها مدور cycloid و شانه ای  ctenoid می باشند. استخوانهای سرپوش آبششی فاقد زره هستند. این راسته دارای سه خانواده است:

1. خانواده Mugilidae یا کفال ماهیان
2. خانواده Atherinidae یا گل آذین ماهیان
3. خانواده Sphyranidae یا کودرماهیان

     دو خانواده Mugilidae و Atherinidae درایران در دریای خزریافت می شوند(امینی، 1368).

1 – 4 مشخصات خانواده کفال ماهیان

     بیشتر ماهیان این خانواده در آب دریا زندگی می کنند. ماهیان این خانواده سری پهن و دارای فلس می‌باشند. بدن طویل و در بخش پیشین تا حدودی پهن می باشند. بدن بوسیله فلسهای نسبتأ درشت که معمولأ مدور بوده( در برخی از گونه های مناطق گرمسیری شانه ای می باشند) پوشیده شده است. این ماهیان فاقد دندان یا واجد دندانهای کوچک می باشند. خارهای برونشی طویل و باریک و140 – 60 عدد می باشند. کفال ماهیان دارای دو باله پشتی جدا از هم بوده که شعاعهای سخت اولین باله پشتی 4 عدد می باشند. باله پشتی دوم 3 – 2 عدد شعاع سخت و 12 – 7 عدد شعاع نرم دارد. استخوانهای باله شکمی بوسیله یک رباط به ترقوه متصل می شوند. باله های سینه ای در بالا قرار دارند. کیسه شنا بزرگ بوده و روده طویل می باشد. تعداد مهره های ستون فقرات 26 – 24 عدد یا 30 – 24 عدد است. این ماهی فاقد خط جانبی یا دارای خط جانبی ناقص است. در پهلوها دارای 9 – 6 نوار طولی هستند. طول بیشتر گونه هاcm 70 – 50 است. کفال ماهیان دارای 100 گونه اند که در آبهای مناطق گرمسیری یافت می‌شوند (وثوقی و مستجیر، 1373).

فهرست مطالب مقاله بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus, در ادامه قابل مشاهده می باشد.

• فصل اول : مروري بر تحقيقات گذشته
• 1-1 پيشينه تحقيق8-5
• 1-2 تاكسونومي9-8
• 1-3 مشخصات كلي راسته كفال ماهي شكلان 9
• 1-4 مشخصات خانواده كفال ماهيان 10
• 1-5 مشخصات كفال طلايي 12-10
• 1-6 زيست شناسي كفال طلايي 13-12
• 1-6-1 مشخصات زيستي كفال طلايي 13
• 1-6-1-1 تحمل درجه حرارت 13
• 1-6-1-2 تحمل شوري 13
• 1-6-1-3 تحمل مقادير اكسيژن 13
• 1-6-1-4 تغذيه كفال طلايي 14-13
• 1-7 ارزش اقتصادي كفال ماهيان 15-14
• 1-8 ارزش غذايي ماهي كفال 16
• 1-9 پراكنش كفال ماهيان 18-16
• 1-10 درياي خزر22-18
• 1-11 توليد مثل كفال طلايي 23-22
• 1-11-1 دستگاه توليد مثل كفال طلايي 25-23
• 1-11-2 اسپرماتوژنز 25
• 1-11-3 ساختمان اسپرماتوزوئيد 26
• 1-11-4 فعاليت اسپرماتوزوئيد 27
• 1-11-5 رابطه بين ميزان ATP و تحرك اسپرم 28
• 1-11-6 مكانيزم چرخشي انتقال انرژي در ATP سنتاز 31-28
• 1-11-7 AMP حلقوي بعنوان يك پيامبر ثانويه 37-32
• 1-11-8 extenders 40-37
• فصل دوم: روش تحقيق و مواد
• 2-1 مواد و وسايل مورد نياز 43-42
• 2-1-1 خصوصيات كيت تعيين ATP  43
• 2-1-2 اجزاي كيت تعيين ATP 43
• 2-1-3 روش آماده سازي محلولها 44
• 2-1-4 خصوصيات و كاربردهاي بافر HEPES 45-44
• 2-1-5 روش آماده سازي محلول بافر HEPES45
• 2-1-6 روش آماده سازي محلول بي كربنات سديم46
• 2-1-7 روش آماده سازي محلول گليسرول 10% و گلوكزM 3/0 46
• 2-2 روش كار  50-46
• فصل سوم : نتايج تحقيق
• نتايج  62-52
• فصل چهارم: بحث و نتيجه گيري و پيشنهادات
• بحث و نتيجه گيري 69-64
• پيشنهادات 70
• منابع فارسي 71
• منابع لاتين

در صورت تمایل شما می توانید مقاله بررسی ميزان ATP در اسپرم مولدين نر ماهی كفال طلايی Mugil auratus را به قیمت 16900 تومان از سایت فراپروژه دانلود نمایید. اگر در هر کدام از مراحل خرید یا دانلود با سوال یا ابهامی مواجه شدید می توانید از طریق آدرس contact-us@faraproje.ir و یا ارسال پیامک به شماره: 09382333070 با ما در تماس باشید. با اطمینان از وب سایت فراپروژه خرید کنید، زیرا پشتیبانی سایت همیشه همراه شماست.